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Mouse OPN ELISA試劑盒參考數(shù)值

更新時間:2022-08-19      瀏覽次數(shù):941

Mouse OPN ELISA試劑盒參考數(shù)值

1.  檢測范圍6.25 ng/mL  200 ng/mL。

2.  靈敏度:檢測濃度小于1.0 ng/mL

3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% 板間變異系數(shù)小于15% 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包小鼠骨橋素OPN)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠骨橋素OPN)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度

微信圖片_20220819091646.jpg

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B50μL,37℃避光孵育15min。

  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD

驗結(jié)果計算

所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程將樣品的OD值代入方程,計算出樣品濃度


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